細胞傳代方法您做對了嗎？

細胞與試劑方面：

1、細胞(單層細胞，鏡檢適合)

2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等適合細胞有要求的培養(yǎng)液)

3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1 萬單位）

4、7.5％NaHC03 溶液

5、0.25％胰蛋白酶

6、 PBS 洗液。

實驗小用具方面：

1、小方瓶(100m1)

2、克氏瓶

3、膠塞

4、吸管(10ml、1m1）

5、細胞吹打管（20 ml）(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓**)

6、C02 孵箱

7、超凈臺

8、倒置顯微鏡

9、4℃、- 20℃冰箱

細胞傳代的操作步驟

1、挑選細胞：鏡檢細胞，挑選生長狀態(tài)良好，細胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細胞。

2、配制細胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi)，加入滅活小牛血清10m1，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。

3、消化細胞：先用PBS 洗液沖洗細胞表面1-2 次，每次10m1，棄去洗液，向細胞瓶內(nèi)加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細胞瓶平放，使消化液完全覆蓋細胞表面。

4、至細胞完全脫落到胰酶中：每瓶加入10m1 細胞培養(yǎng)液吹打分散細胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝，然后補加至所需培養(yǎng)量。

5、加塞，置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2～4 天成片(由細胞接種濃度決定)。

6、填寫傳代記錄。