Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動DNA聚合酶

產品描述

    Hieff^TM Hot Start DNA Polymerase(HS DNA Polymerase)是經過化學修飾的熱穩定重組型Taq DNA Polymerase，在室溫下活性被完全封閉，只有經過95℃加熱后活性才被釋放，可防止在樣品準備及反應升溫階段產生非特異擴增和引物二聚體。與基于抗體的熱啟動Taq酶相比，化學修飾的HieffTM Hot Start DNA Polymerase活性封閉更徹底，嚴謹性更高；與現有化學修飾的熱啟動Taq酶相比，HieffTM Hot Start DNA Polymerase的激活時間只需要5分鐘，兼容現有的PCR程序。Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動DNA聚合酶
  Hieff^TM Hot Start DNA Polymerase的反應緩沖液中的組分、濃度都經過優化，使得引物與模板結合的嚴謹性提高，從而*大程度的減少非特異擴增和引物二聚體，非常適合于從復雜模板(基因組，cDNA)中擴增低拷貝基因。PCR產物3’端帶A，可克隆至T載體。另外，產品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的擴增。
Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動DNA聚合酶

活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃ 30分鐘內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。收到產品后放到-20 oC保存。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
核酸內切酶殘留檢測：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測: 50 μl體系中，加入2U本品，以ddH2O為模板，擴增E.coil 16s rDNA基因。35個循環后擴增產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動DNA聚合酶
功能檢測：PCR體系中加入1.25U本品，以100 ng人基因組DNA為模板擴增α-1-antitrypsin基因。35個循環后取10% PCR產物進行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，觀察到單一的360 bp條帶。

引物設計注意事項
1）引物3’端*后一個堿基*好為G或者C；
2）引物3’端*后8個堿基應避免出現連續錯配；
3）引物3’端盡量避免發夾結構出現；
4）引物的Tm值調整至55℃-65℃之間。
5）引物額外附加序列，即與模板非配對序列，不應參與引物Tm值計算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之間；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動DNA聚合酶